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蛋白冻干与应用相关常见问题

蛋白冻干与应用相关常见问题

蛋白冻干相关常见问题(Lyophilization FAQ)

1. 蛋白为什么要冻干?冻干对蛋白的影响有哪些?

蛋白质对热敏感,冻干能使绝大部分蛋白质的活性保留下来,提高蛋白的稳定性并延长保存时间,同时降低运费。

冻干有可能会造成蛋白的活性部分损失,聚集和其它变性问题。但可以通过添加保护剂(稳定剂,添加剂,辅料)和控制冻干的各种条件来尽可能降低这些负面的影响。


2. 冻干前为什么向蛋白溶液中加保护剂?一般冻干保护剂有哪几种?你们的产品通常加的保护剂是什么?

保护剂是用来在冻干和储存过程中保护蛋白的。常用的保护剂或稳定剂有糖类,多元醇,聚合物,表面活性剂,某些蛋白和氨基酸等。我们通常加8%(质量比体积)的海藻糖和甘露醇作为冻干保护剂。

海藻糖可明显阻止蛋白质二级结构改变以及冻干过程中蛋白质的伸展和聚集。

甘露醇也是一种普遍应用的冻干保护剂和填充剂。有文献报道甘露醇可以降低某些蛋白的冻干后聚集情况。


3. 怎样复溶蛋白干粉?我应该加无菌水还是PBS来复溶?

我们建议使用过滤后的无菌纯化水作为复溶剂。添加纯化水至推荐的体积,轻轻摇晃西林瓶,使蛋白溶解完全均匀。切忌剧烈摇晃。PBS或者其它缓冲液也可以用来做复溶剂,因为PBS中的盐可以在体积微量的情况下忽略不计。如果可能,我们建议做一下两种复溶剂的效果比较。


应用范围相关常见问题(Application/ActivityFAQ)

1. 为什么有的蛋白带标签?

使用蛋白标签的最初目的用于蛋白纯化。此外,在某些试验中可以用于检测蛋白。还有,Fc标签有稳定融合蛋白的作用。 Fc可以自主的形成二聚体,因此他可以帮助融合蛋白,特别是受体,形成有活性的二聚的形式。安诺伦生物也有单独的人的IgG1Fc片段和小鼠的IgG1 Fc片段的产品,可以作为实验的对照。


2. 标签会影响蛋白活性吗?

这个需要具体情况具体分析。对于某些应用,小的标签,如组氨酸标签,可能对蛋白活性的影响比较小,因此也无需将其去除。例如,组氨酸标签对一些蛋白的正确折叠是没有影响的,因此,Protein DataBank中已有100多个蛋白结构式是带有组氨酸标签的。如果客户担心标签是不是会对蛋白活性有影响,可以查看我们的蛋白网页上是不是有活性的数据。如果没有查到相应的信息,也请联系我们,我们可以帮您查询是否有最新的活性结果。另外,有些蛋白标签是可以通过酶切去除的,如果您对相关的信息感兴趣,请随时与我们联系。


3. 安诺伦生物产品可以用于一些没有列在Certificateof Analysis中的应用吗?

如果某种应用没有列在安诺伦生物Certificateof Analysis中或是安诺伦生物还没有测试过,请电话联系我们。我们会查看现在是不是可以做相应的试验,或是发表的文章中有其他的购买者已做了相同的活性检测。


保存与稳定性相关常见问题(Storage&StabilityFAQ)

1. 产品如何保存?

对于冻干的蛋白产品,液体的抗体产品,以及ELISA试剂盒产品,您收到产品后可以直接储存在-70℃(或更低)的冰箱中,至少可以保存12个月。我们推荐您使用前根据自己的需要,将蛋白复溶后分装,储存在-70℃的冰箱中,避免反复的冻融。

对于cDNA产品,您可以将其保存在干燥阴凉的地方(2-8℃),至少可以保存6个月。


定量相关常见问题(QuantificationFAQ)

1. 你们的蛋白和抗体如何定量的?

通常我们通过测蛋白和抗体的UV吸收值来定量。蛋白和抗体的浓度可以通过消光系数来计算。我们还可以用BCA法,高效液相,电泳来定量。


2. 为什么用我的定量方法测出来的结果与你们标签上的定量不符?

不同的定量方法测出来的结果是不同的。有时候定量方法不同造成的结果差异很显著。还有一种可能性是蛋白在储存过程中产生了聚集,经过冻干复溶后,离心导致了蛋白损失。我们对每一批蛋白和抗体都做质检测定,但仍不能完全避免同一批中有少数瓶跟其它瓶不同。这种情况比较少见,而且可以通过我们的质控上的努力尽量避免。

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