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circRNA荧光定量PCR实验

circRNA荧光定量PCR实验

circRNA是通过特殊的选择性剪切产生封闭环状结构的非编码RNA。circRNA不受RNA外切酶的影响,比线性RNA表达更稳定。研究表明,某些特殊的circRNA分子富含miRNA结合位点,在细胞中起到miRNA sponges的作用,进而解除miRNA对其靶基因的抑制作用。ciRS-7(CDR1a)包含 63 个保守的miR-7结合位点,该circRNA在细胞中能够有效吸附miR-7。而miR-7作为关键调节因子广泛参与癌症途径,如抑制在乳腺癌、胶质瘤等癌症中表达显著上调的Pak1的表达;miR-7也能通过结合α-synuclein抑制其表达。这些研究暗示ciRS-7通过ceRNA机制调节miR-7的功能,是神经系统疾病和癌症治疗的潜在靶点。


circRNA转录过程



图1 circRNA转录过程  

               

ciRs-7作用机制


图2 ciRs-7作用机制

由于circRNA特殊结构及其表达丰度低的原因,circRNA定量PCR实验还存在一定困难。本公司经过特殊的引物设计、反转录过程及PCR扩增过程的实验条件优化,能够高效定量检测circRNA的表达。

CircRNA定量PCR实验流程如下:

1、样品RNA抽提

2、RNA质检

3、RNA逆转录cDNA

4、circRNA特殊引物设计及其调试



图3 circRNAdivergent 引物设计

5、circRNA PCR扩增

6、PCR数据统计

只要您提供样本及待检测的circRNA名称,本公司可为您完成后续的所有实验。

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