ELISPOT分析技术服务

ELISPOT分析技术服务

·Elispot检测原理

ELISPOT就其原理来说实在是很简单的，从本质上说和ELISA的原理是一样的:细胞受到刺激后局部产生细胞因子，此细胞因子被特异单克隆抗体捕获。细胞分解后，被捕获的细胞因子与生物素标记的二抗结合，其后再与碱性磷酸酶标记的亲和素结合。BCIP/NBT底物孵育后，PVDF孔板出现“紫色”的斑点表明细胞产生了细胞因子，通过ELISPOT酶联斑点分析系统对斑点的分析后得出结果。

·与ELISA的区别

ELISPOT法源自ELISA，又突破传统ELISA法，是定量ELISA技术的延伸和新的发展。两者都是检测细胞产生的细胞因子或其他可溶性蛋白，它们最大的不同在于:
1、ELISA通过显色反应，在酶标仪上测定吸光度，与标准曲线比较得出定量的可溶性蛋白总量。
2、ELISPOT通过显色反应，在细胞分泌这种可溶性蛋白的相应位置上显现清晰可辨的斑点，可直接在显微镜下人工计数斑点或通过ELISPOT分析系统对斑点进行计数，1个斑点代表1个活性细胞，从而计算出分泌该蛋白或者细胞因子的细胞的频率。（某些研究不仅要测细胞因子生成量，还需检测分泌此细胞因子的细胞频率）
3、由于是单细胞水平检测，ELISPOT比ELISA和有限稀释法等更灵敏，能从 20万-30万细胞中检出 1个分泌该蛋白的细胞。
4、捕获抗体为高亲和力、高特异性、低内毒素单抗，在研究者以刺激剂激活细胞时，不会影响活化细胞分泌细胞因子。

·预包被ELISpot

1. 特异性单抗包被在培养孔底部，通过非特异性蛋白溶液封闭多余空白位点
2. 加入单个细胞悬液及刺激物培养，阳性细胞经活化分泌细胞因子，细胞因子就近被特异性包被抗体捕获；
3. 移出细胞，板底留下细胞因子的“影像”
4. 加入酶标记的检测抗体，检测抗体和“影像”——细胞因子结合，形成“抗体-抗原-抗体”夹心结构
5. 加入显色底物，在酶的催化分解下，生成不可溶的色素，沉淀在膜上，即形成斑点
6. 斑点计数，结果分析。

应用范围

·　疫苗研究开发

· 干细胞功能分析

· 自身免疫疾病的诊断、免疫治疗的监控和预后分析

· 化合物和药物免疫学反应的筛选

· 器官移植中排斥反应的预测

· 细胞杂交瘤的筛选

· 基因治疗中转染效率的检测