客服电话:400-965-8633
生命科学一站式供应商


ELISPOT分析技术服务

ELISPOT分析技术服务


·Elispot检测原理

ELISPOT就其原理来说实在是很简单的,从本质上说和ELISA的原理是一样的:细胞受到刺激后局部产生细胞因子,此细胞因子被特异单克隆抗体捕获。细胞分解后,被捕获的细胞因子与生物素标记的二抗结合,其后再与碱性磷酸酶标记的亲和素结合。BCIP/NBT底物孵育后,PVDF孔板出现“紫色”的斑点表明细胞产生了细胞因子,通过ELISPOT酶联斑点分析系统对斑点的分析后得出结果。


·与ELISA的区别

ELISPOT法源自ELISA,又突破传统ELISA法,是定量ELISA技术的延伸和新的发展。两者都是检测细胞产生的细胞因子或其他可溶性蛋白,它们最大的不同在于:
1、ELISA通过显色反应,在酶标仪上测定吸光度,与标准曲线比较得出定量的可溶性蛋白总量。
2、ELISPOT通过显色反应,在细胞分泌这种可溶性蛋白的相应位置上显现清晰可辨的斑点,可直接在显微镜下人工计数斑点或通过ELISPOT分析系统对斑点进行计数,1个斑点代表1个活性细胞,从而计算出分泌该蛋白或者细胞因子的细胞的频率。(某些研究不仅要测细胞因子生成量,还需检测分泌此细胞因子的细胞频率)
3、由于是单细胞水平检测,ELISPOT比ELISA和有限稀释法等更灵敏,能从 20万-30万细胞中检出 1个分泌该蛋白的细胞。
4、捕获抗体为高亲和力、高特异性、低内毒素单抗,在研究者以刺激剂激活细胞时,不会影响活化细胞分泌细胞因子。


ELISPOT分析技术服务


·预包被ELISpot

1. 特异性单抗包被在培养孔底部,通过非特异性蛋白溶液封闭多余空白位点
2. 加入单个细胞悬液及刺激物培养,阳性细胞经活化分泌细胞因子,细胞因子就近被特异性包被抗体捕获;
3. 移出细胞,板底留下细胞因子的“影像”
4. 加入酶标记的检测抗体,检测抗体和“影像”——细胞因子结合,形成“抗体-抗原-抗体”夹心结构
5. 加入显色底物,在酶的催化分解下,生成不可溶的色素,沉淀在膜上,即形成斑点
6. 斑点计数,结果分析。


ELISPOT分析技术服务


应用范围

· 疫苗研究开发

· 干细胞功能分析

· 自身免疫疾病的诊断、免疫治疗的监控和预后分析

· 化合物和药物免疫学反应的筛选

· 器官移植中排斥反应的预测

· 细胞杂交瘤的筛选

· 基因治疗中转染效率的检测

在线客服
 
 
 工作时间
周一至周五 :8:30-18:00
周六至周日 :9:00-17:00
 联系方式
客服热线:400-965-8633
固定电话:010-56256916
邮箱:inquiry@annoron.com